没有封闭直接敷一抗了会怎样,封闭完直接一抗吗

没有封闭直接敷一抗了会怎样,封闭完直接一抗吗

western blot加一抗前忘了封闭会有什么后果？对你的目的条带影响不大不过可能有会杂带而且背景会不干净不可能完全没影响不然何必多这么个一小时的步骤三wb封闭完没有一抗如何保存wb封闭完没有一抗保存方法如下。1、加50%甘油，20度也不会冻结，可保存3-5年。2、分袭扮装保存族禅让，加入少量叠氮化钠(大约0.01%w/v

抗体除了会和抗原特异性结合，还会由于静电吸附及其他非特异性反应结合在其他位置上，加BSA——就是先加一种蛋白质去可能会和抗体非特异性结合的位点结合先，这一般不会，不过不推荐封闭过长时间天一湖医者2022-03-28 有帮助封闭时间过短可能会敷不上，过长一般不会。未来9 2022-03-28 有帮助如果一抗封闭时间过长，非特异性的条带也

第一次试这个抗体，为啥我的WB能做成这幅鬼样子啊用了12.5%的胶，准备明天用10%的胶再做一次，条带在35-55之间看小红书上有人提议封闭过夜能减少非特异性，除了4 ℃下摇床，过夜封闭，回收一抗，20℃保存供重复使用，0.1% TBST润洗NC膜3次，每次5 min;(这一步很重要，一般抗体稀释比参考抗体说明书，但是如果目标蛋白丰度很低

2:洗完以后，再敷一抗。接着后面正常重复！(重新操作后的结果，黑点是因为牛奶现配，前面讲过原因，可以看看之前的帖子) 处理思路就是，因为没有了牛奶封闭杂位点，丁当+5 很大可能会重来，封闭是用杂蛋白将膜上没有蛋白的位置给结合了，直接孵育一抗，很有可能将抗体

答：① 免疫组化可以用来进行定位，但是不能精确定量，而且有时会有假阳性，不易与背景区分；Western blot可以特异性检测某个蛋白质分子，进行定量，但是不能定位。②封闭这一步，是最不会出错的，敷1h-2h都是可以的我甚至怀疑敷时间更短也是可以的，毕竟我们学校有的