WB封闭时间过长有什么影响,wb牛奶封闭太久会怎么样

wb煮好的蛋白负20可以放多久 2023-12-19 16:34 696 墨鱼

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有可能把你想要的条带也给封闭了，最终获得的信号很弱或者没有western blot 一抗孵育4小时当然有影响的，一抗孵育时间太长容易导致非特异性吸附加深一般可以室温孵育三十分，然后四度过夜。或者选择室温孵育2小时直接二抗。

🌸1、常见的封闭液有5%脱脂奶粉、BSA和Western Blot膜封闭液(生物试剂公司提供)。但是封闭液的选取具体得看抗体说明书，有的抗体是明确要求只能用BSA,而封闭液浓度的选择也是具体得▲ 高背景：封闭不充分、抗体孵育浓度过高、孵育时间过长或温度过高、洗膜不充分、显影时间过长、发光底物过度残留等。▲非特异性条带：抗体特异性差，也可能样品量大，抗体浓度高。▲

转膜时会有比较明显的产热现象，并导致转膜液的电阻变小，最终影响转膜效率、转膜液的缓冲能力、甚至过热导致凝胶熔化或黏附在膜上。因此建议转膜时，在转膜槽内用冰盒降温，并将转膜槽有可能把你想要的条带也给封闭了，最终获得的信号很弱或者没有

WB实验操作详解——封闭发布于2023-10-03 15:28・IP 属地上海· 24 次播放赞同添加评论分享收藏喜欢举报实验生物实验wb实验写下你的评论暂无评论将膜在室温下封闭1 小时，洗膜3 次，每次5 分钟。封闭时间过长和过度洗涤会导致高本底并阻碍检测。用封闭液稀释一抗。前期验证发现BSA 会引起该抗体产生高背景，所以我们建议使用

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